甾類(lèi)同化激素類(lèi)藥物殘留分析技術(shù)測(cè)定方法（六）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(7)組學(xué)技術(shù)

為了能夠高效地追蹤ASs濫用情況，有必要開(kāi)發(fā)新的篩選技術(shù)進(jìn)行非法藥物篩查?；谵D(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)等“omic”技術(shù)，可以通過(guò)間接檢測(cè)其生理作用的方法來(lái)發(fā)現(xiàn)蛋白同化激素濫用。

Riedmaier等介紹了應(yīng)用這些組學(xué)技術(shù)尋找ASs生物標(biāo)志物(biomarker)及檢測(cè)其殘留的潛力。該研究組通過(guò)鑒定牛血細(xì)胞中潛在的基因表達(dá)生物標(biāo)志物，監(jiān)管ASs使用。采用實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(qRT-PCR)定量mRNA基因表達(dá)改變，而血液細(xì)胞是尋找生物標(biāo)志物的理想材料。據(jù)報(bào)道，ASs可影響不同血細(xì)胞的mRNA基因表達(dá)。試驗(yàn)選擇18頭小母牛，平均分成兩組，每組9頭。一組為空白對(duì)照組，另一組給予醋酸群勃龍和雌二醇復(fù)方制劑，連續(xù)給藥39天。采取3個(gè)點(diǎn)血樣檢測(cè)其mRNA表達(dá)情況，通過(guò)生物標(biāo)志物圖譜篩選候選基因。結(jié)果顯示，醋酸群勃龍和雌二醇能夠顯著影響甾體類(lèi)受體(ER-a和GR-a)、細(xì)胞凋亡調(diào)控元件Fas、炎性白細(xì)胞介素(IL-1a、IL-1β、IL-6)、MHCII、CK、MTPN、RBM5和β-肌動(dòng)蛋白mRNA基因的表達(dá)。通過(guò)主成分分析(PCA)顯示這些基因是血液中醋酸群勃龍和雌二醇聯(lián)合使用的潛在標(biāo)志物。

2011年，Anizan等采用甾體類(lèi)靶向II相代謝物分析，調(diào)查分析了動(dòng)物繁殖過(guò)程中天然甾體類(lèi)固醇激素濫用情況。研究采用給動(dòng)物外源給藥雄烯二酮，尋找潛在的生物標(biāo)志物，監(jiān)測(cè)甾體類(lèi)固醇激素在動(dòng)物體內(nèi)的殘留狀況。該研究首次建立了樣品制備方法，尿液需先凍干，然后加入純水溶解，經(jīng)乙酸乙酯LLE提取，SAX固相萃取柱凈化，用水和甲醇-水(25+75，v/v)進(jìn)行淋洗，用0.2%甲酸甲醇和10%氨化甲醇分別進(jìn)行洗脫，氮?dú)獯蹈珊螅状?水(20+80，v/v)復(fù)溶，UPLC-MS/MS測(cè)定，結(jié)果篩選到葡萄糖醛酸本膽烷醇酮、硫酸表雄酮等代謝產(chǎn)物。Regal等通過(guò)HPLC-線性離子阱靜電場(chǎng)軌道阱組合式高分辨質(zhì)譜(LTQ-Orbitrap)來(lái)獲取代謝物組學(xué)數(shù)據(jù)。血清樣品從飼養(yǎng)的奶牛中收集，或者從畜牧飼養(yǎng)不使用性激素(雌二醇-17 β或其酯苯甲酸雌二醇和孕激素)的奶牛中收集。經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)處理和多變量統(tǒng)計(jì)分析(OPLS-DA)，有可能突出重要的血清代謝修飾，從而管理雌二醇和孕激素的使用。這些差異被用來(lái)建立預(yù)測(cè)模型，去監(jiān)控管理這些激素在牛中的非法使用。雌激素和孕激素的潛在生物標(biāo)志物被指出，但還需要結(jié)構(gòu)解釋和說(shuō)明。

基于ASs引起的生理學(xué)變化，采用組學(xué)技術(shù)開(kāi)發(fā)新的篩選方法，并用于檢測(cè)其殘留含量，這項(xiàng)技術(shù)將極具前景。一些非常靈敏的方法，如定量RT-PCR、質(zhì)譜，能夠定量基因、蛋白表達(dá)或代謝物的細(xì)微變化，在生物信息學(xué)統(tǒng)計(jì)工具的幫助下，可以從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中獲取有價(jià)值的信息?？傊?，利用組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)新的物質(zhì)、監(jiān)測(cè)畜牧業(yè)藥物濫用，將是未來(lái)的挑戰(zhàn)。

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