液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

9.2.4.1 適用范圍

適用于牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定。方法檢出限：牛奶中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚為1.0ug/L；奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚為8.0μg/kg。

9.2.4.2 方法原理

牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留，用乙腈作為蛋白沉淀劑和提取劑進行提取，陰離子固相萃取柱進行凈化，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標(biāo)法定量。

9.2.4.3 試劑和材料

甲醇、乙腈：色譜純；氨水、甲酸、氫氧化鈉：分析純。

5mol/L氫氧化鈉溶液：稱取200g氫氧化鈉，用蒸餾水定容到1L。

淋洗液：氨水-水(1+19，v/v)；洗脫液：甲酸-甲醇(1+19，v/v)。

激素及代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：玉米赤霉醇(包括a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇，各50%)純度≥97%；玉米赤霉酮，純度≥97%；己烯雌酚，純度≥99%；己烷雌酚，純度≥98%；雙烯雌酚，純度≥98%。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別準(zhǔn)確稱取適量的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、雙烯雌酚和己烷雌酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配制成1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。再根據(jù)需要以甲醇配制成不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，保存于4℃冰箱中。

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：a-玉米赤霉烯醇-4氘代，純度≥99%；己烯雌酚-8氛代，純度≥98%。

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取適量玉米赤霉烯醇-4氘代和己烯雌酚-8氘代標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇分別配制成1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。再以甲醇稀釋成適用濃度的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，保存于4℃冰箱中。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及內(nèi)標(biāo)工作溶液混合后在氮吹儀中吹干，以基質(zhì)提取液溶解，渦旋30s后即為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

Oasis MAX 陰離子固相萃取柱或相當(dāng)者：60mg，3mL。

9.2.4.4 儀器和設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧電離源；自動固相萃取儀或固相萃取裝置；氮氣吹干儀；渦旋振蕩器；離心機：轉(zhuǎn)速大于3500r/min；高速離心機：轉(zhuǎn)速大于9000r/min，溫度可控制在4℃。

9.2.4.5 樣品前處理

(1) 試樣制備

牛奶：取50mL新鮮或解凍的牛奶混合均勻，3500r/min離心5min，取下層；奶粉：取12.5g奶粉于燒杯中，加適量35～50℃水將其慢慢溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，待冷卻至室溫，用水定容混勻。取50mL，以3500r/min離心5min，取下層。

(2) 樣品量取

于50mL離心管中，分別加入不同量混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使各被測組分玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚的濃度為2.5ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL。再分別加入適量內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使其濃度均為10ng/mL，在氮吹儀上于40℃水浴中吹干。取5個陰性樣品，每個樣品為5mL，置于上述離心管中渦旋混合后，加10mL乙腈，渦旋混合3min，3500r/min離心10min，取上清液于離心管中，再向樣品中加入5mL乙腈，同前操作，合并提取液，50℃下氮吹至體積小于0.1mL。加水10mL，用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至11.0，4℃，9000r/min離心5min，備用。

(3)提取凈化

固相萃取凈化條件：先用2mL甲醇、2mL水將柱子活化，流速均為4mL/min。將樣品上清液上柱，流速為1mL/min，依次用1mL淋洗液、0.5mL甲醇以3mL/min的速度淋洗，通入20mL空氣以4mL/min的速度吹過OasismAX柱。用4mL洗脫液洗脫，流速為1mL/min，加入30mL空氣以6mL/min的速度吹過OasismAX柱，收集洗脫液。將洗脫液在氮吹儀上于40℃水浴中吹干，加入1mL流動相，渦旋30s溶解。溶液過0.2μm濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

(4) 基質(zhì)提取液

空白樣品，除不加入標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和內(nèi)標(biāo)工作溶液外，其他操作同上述步驟處理后得到的溶液。

(5) 實測樣品溶液的制備

取待測樣品5mL于50mL離心管中，加入適量內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使其最終定容濃度均為10ng/mL按上述步驟操作。

(6) 空白基質(zhì)溶液的制備

取陰性樣品5mL于50mL離心管中，按上述步驟操作。

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