蜂蜜中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留量測定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.1.7 分析條件的選擇

(1) 提取凈化條件的優(yōu)化

1) 凈化樣品固相萃取柱的選擇

在本方法的研究中，用蜂蜜樣品實驗了OasisHLB固相萃取柱、C18固相萃取柱、陰離子交換柱(醋酸型)和陽離子交換柱(苯磺酸型)對四種抗生素的提取效率和凈化效果。實驗發(fā)現(xiàn)，陽離子交換柱回收率低(只有50%～60%)，且凈化效果也不理想，而C18固相萃取柱則存在著不同批次之間回收率的顯著差異。而使用OasisHLB固相萃取柱和陰離子交換柱凈化樣品回收率均在70%以上，凈化效果也令人滿意。因此本方法選擇OasisHLB固相萃取柱和陰離子交換柱雙柱提取和凈化樣品。

2) 提取液pH對回收率的影響

本方法用0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取蜂蜜樣品中四種抗生素殘留。實驗發(fā)現(xiàn)，提取液的pH不同，對回收率有較大影響。用6個不同pH的提取液，按規(guī)定方法進(jìn)行回收率實驗，回收率數(shù)據(jù)見表12-5。

表12-5 0.1mol/L Na2EDTA-Mellvaine緩沖溶液pH對回收率的影響

從表12-5可以看出：四環(huán)素、金霉素在pH=3～4.5區(qū)間內(nèi)，回收率是基本穩(wěn)定的，當(dāng)pH>5.0時，回收率隨pH的增大而降低；土霉素、強(qiáng)力霉素從pH=3.0起，隨pH的增大而增大，當(dāng)pH=4時，達(dá)到最大值，而后又隨pH的增大，其回收率逐步降低。因此，本方法選擇pH=4.0的0.1mol/L Na2EDTA-Mellvaine緩沖溶液作為蜂蜜中四種抗生素的提取液。

3) OasisHLB固相萃取柱洗脫劑的選擇

本方法實驗了乙腈、甲醇、甲醇-乙酸乙酯混合液、乙酸乙酯作為OasisHLB固相萃取柱的洗脫劑，比較了不同洗脫劑的凈化效果。實驗發(fā)現(xiàn)，用乙腈、甲醇作洗脫劑，用量在5mL以內(nèi)，四種抗生素均能從OasisHLB柱上完全洗脫下來。但絕大多數(shù)樣品在土霉素和四環(huán)素出峰區(qū)域內(nèi)有干擾峰，影響其定量，若遇到顏色深或成分復(fù)雜的蜜樣，對土霉素和四環(huán)素的影響更嚴(yán)重。使用不同配比的甲醇乙酸乙酯溶液，凈化效果比甲醇、乙腈好，仍對土霉素、四環(huán)素的測定有干擾。使用乙酸乙酯作洗脫劑，雖然用量稍多些，但對不同蜂蜜樣品，均能獲得令人滿意的凈化效果和較高回收率。因此，本方法選用乙酸乙酯作為OasisHLB柱的洗脫劑。

4) OasisHLB固相萃取柱和陰離子交換柱洗脫劑用量的選擇，實驗數(shù)據(jù)見表12-6和表12-7。

表12-6 OasisHLB固相萃取柱洗脫劑用量對回收率(%)的影響

表12-7 陰離子交換柱洗脫劑用量對回收率(%)的影響

表12-6和表12-7中數(shù)據(jù)表明，OasisHLB固相萃取柱用15mL乙酸乙酯洗脫和陰離子交換柱用4mL流動相洗脫其四種四環(huán)素的回收率均在99%以上。

(2) 液相色譜分析柱和流動相的選擇

在GB/T18932.4-2002國家標(biāo)準(zhǔn)研究的基礎(chǔ)上，對uBondapak C18 300mm×4.0mm色譜柱和Inertsil C8 150mm×2.1mm色譜柱進(jìn)行了比較，實驗發(fā)現(xiàn)，這兩種色譜柱分離度和靈敏度均能滿足要求，但uBondapak C18柱流速在1.5mL/min，進(jìn)質(zhì)譜儀之前必須分流，而分流時對四種四環(huán)素結(jié)果的測定產(chǎn)生一定誤差，而使用Inertsil C8柱，不需分流，定量準(zhǔn)確度優(yōu)于uBondapakC18柱，并且又對所使用的流動相進(jìn)行了比較，比較結(jié)果見表12-8。

表12-8 兩種色譜柱LC-MS-MS測定的比較

通過以上對兩種色譜柱的比較，本方法選用InertsilC8-3為四環(huán)素族抗生素的分析柱。

(3)質(zhì)譜條件的確定

采用注射泵直接進(jìn)樣方式，以5uL/min分別將土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液注入離子源，用正離子檢測方式對四種四環(huán)素族抗生素進(jìn)行一-級質(zhì)譜分析(Q1掃描)，得到分子離子峰分別為461，445，479和445，再對準(zhǔn)分子離子進(jìn)行二級質(zhì)譜分析(子離子掃描)，得到碎片離子信息。土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素二級質(zhì)譜圖。然后對去簇電壓(DP)，碰撞氣能量(CE)，電噴霧電壓、霧化氣和氣簾氣壓力進(jìn)行優(yōu)化，使分子離子與特征碎片離子對強(qiáng)度達(dá)到最佳。然后將質(zhì)譜儀與液相色譜聯(lián)機(jī)，再對離子源溫度，輔助氣流速進(jìn)行優(yōu)化，使樣液中四種四環(huán)素族抗生素離子化效率達(dá)到最佳。

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