牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑及其代謝物殘留量測(cè)定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

16.2.1.7 分析條件的選擇

(1)提取凈化

牛奶樣品為高蛋白液態(tài)樣品，參考文獻(xiàn)試驗(yàn)了不同的提取劑，乙腈甲醇能很好地沉淀蛋白，但對(duì)羅硝唑的提取率只有60%左右且濃縮時(shí)比較費(fèi)時(shí)。乙酸乙酯能很好地提取出五種目標(biāo)分析物但是不能沉淀蛋白，提取溶液很容易乳化。5g樣品先加入5mL乙腈來(lái)沉淀蛋白，再加入20mL乙酸乙酯來(lái)提取分析物，便解決了以上單一有機(jī)溶劑提取時(shí)遇到的問(wèn)題。所以方法提取溶液選擇5mL乙腈+20乙酸乙酯提取兩次。

硝基咪唑類藥物為兩性化合物，在弱酸性溶液中呈分子狀態(tài)。根據(jù)其性質(zhì)，在添加水平5ug/kg，試驗(yàn)了不同類型的固相萃取柱，包括C18柱(反相萃取柱)，硅膠、氧化鋁柱(正相萃取柱)，SCX柱(強(qiáng)陰離子交換柱)。結(jié)果表明，用C18柱凈化效果較差，基質(zhì)影響比較嚴(yán)重；用硅膠柱和氧化鋁柱處理的凈化效果也不好且五種藥物的絕對(duì)回收率小于60%；而用SCX柱不僅可以消除干擾而且回收率在90%以上。這是因?yàn)閺?qiáng)陽(yáng)離子交換柱上的磺酸基能有效的吸附質(zhì)子化的硝基咪唑類藥物，即使是極性強(qiáng)的有機(jī)溶劑亦不能洗脫。這樣就可以用丙酮、甲醇淋洗掉大部分干擾成分，然后用5%氨水-乙腈置換洗脫目標(biāo)分析物。由洗脫曲線(見(jiàn)圖16-3)可知前2mL洗脫液未將分析物洗脫下來(lái)，而后4mL洗脫液可將5種藥物從固相萃取柱.上完全洗脫下來(lái)。同時(shí)硝基咪唑類藥物熱不穩(wěn)定，在氮吹一步應(yīng)注意不能將其完全吹干，若完全吹F就會(huì)降低方法的回收率，尤其是二甲硝咪唑吹干后會(huì)損失30%左右。

圖16-3 硝基咪唑類藥物在SCX柱上的累積洗脫曲線

(2)色譜條件的建立

實(shí)驗(yàn)采用了0.1%乙酸-乙腈做流動(dòng)相，采用時(shí)間梯度洗脫，在150mm×2.1mm(i.d.)，填料顆粒直徑4.6μm的苯基柱分離待測(cè)組分，分析物在最大程度上得到了分離，且峰對(duì)稱尖銳，加之質(zhì)譜的高選擇性，通過(guò)MRM色譜圖能夠較好的定性定量5種分析物，無(wú)內(nèi)源干擾物影響組分的測(cè)定。

(3)質(zhì)譜條件的建立

用蠕動(dòng)泵以10μL/min注入1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)確定各化合物的最佳質(zhì)譜條件，包括選擇特征離子對(duì)，優(yōu)化電噴霧電壓、鞘氣、輔助氣、碰撞能量等質(zhì)譜分析條件。分析物的混標(biāo)液和內(nèi)標(biāo)混合液進(jìn)入ESI電離源，在正、負(fù)離子掃描方式下分別對(duì)分析物進(jìn)行-級(jí)全掃描質(zhì)譜分析，得到分子離子峰。5種分析物及3種內(nèi)標(biāo)均在正模式下有較高的響應(yīng)，負(fù)模式下信號(hào)值很低。然后對(duì)各分子離子峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析(多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM掃描)，得到碎片離子信息，各化合物的[M+H]離子碎裂機(jī)理可用圖16-4表示。

圖16-4 硝基咪唑類藥物分子離子MRM模式下的裂解示意圖

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