河豚魚、鰻魚和烤鰻中16種苯并咪唑類藥物殘留量測(cè)定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

17.2.2.7 分析條件的選擇

(1)提取條件的優(yōu)化

1)提取劑

苯并咪唑類藥物分子基本上是中等極性分子，其水溶性很差，考慮到乙酸乙酯和二氯甲烷的極性與BZs接近，BZs在其中溶解能力較強(qiáng)，分別對(duì)乙酸乙酯、二氯甲烷、DMF(二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲亞砜)等有機(jī)溶劑提取BZs的提取效率進(jìn)行試驗(yàn)。

試驗(yàn)結(jié)果表明采用二氯甲烷提取BZs，回收率均低于50%；與采用單純的乙酸乙酯作提取劑相比，DMSO與乙酸乙酯混合溶劑對(duì)苯并咪唑的提取無(wú)明顯幫助，且給后續(xù)的處理帶來(lái)麻煩；

DMF與乙酸乙酯混合溶劑對(duì)2AA、ASOX、THI-OH三種極性較大的代謝物的回收率有明顯的負(fù)影響，回收率下降至只有10%～20%，而采用堿性乙酸乙酯提取BZs，回收率可穩(wěn)定在理想水平。

2)提取劑pH

BZs是弱堿性化合物，pH對(duì)具有弱堿性的物質(zhì)的溶解性或分配系數(shù)影響很大，調(diào)節(jié)pH使組分在水相中處于中性分子狀態(tài)，或達(dá)到兩性分子的等電點(diǎn)，水溶性降低，易被有機(jī)溶劑萃取。分別以不加堿液、0.5mL 1mol/L KOH、0.2mL 50%KOH、0.4mL 50%KOH作對(duì)比試驗(yàn)考察提取溶劑pH對(duì)苯并咪唑藥物在動(dòng)物組織中提取效率的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明提取劑的pH高低對(duì)ALB、OXI的回收率無(wú)明顯影響，CAM、FEN、FLU、MEB、OXFSUL、THI、THI-OH在較高堿液濃度(0.4mL 50%KOH)時(shí)回收率明顯下降一半，2AA、ASOX、ASF的回收率下降至10%以下?；谝陨显囼?yàn)結(jié)果，當(dāng)同時(shí)測(cè)定16種苯并咪唑藥物殘留時(shí)綜合考慮極性較大的幾種代謝物受pH影響明顯的現(xiàn)象，以0.15mL 50%的氫氧化鉀-乙酸乙酯作提取劑。

3)抗氧化劑

一些苯并咪唑藥物在樣品前處理過程中易發(fā)生氧化反應(yīng)而致?lián)p失，所以試驗(yàn)過程中在樣品提取及隨后的蒸發(fā)濃縮過程中加入抗氧化劑以保護(hù)分析物，分別試驗(yàn)了不同濃度的BHT(丁基化羥基甲苯)、BHA，試驗(yàn)結(jié)果表明加入1%BHT或BHA可明顯提高0XF、OXFSUL、ASOX、ASF的回收率，對(duì)THI、MEB的回收率也有好的影響，BHT對(duì)分析物的保護(hù)作用稍好于BHA。

(2)凈化條件的優(yōu)化

樣品用堿性乙酸乙酯提取，由于乙酸乙酯屬中等極性溶劑，有可能提取出類脂物，因此提取濃縮后需去除類脂物。脫脂溶劑選擇了對(duì)類脂物有良好溶解度而對(duì)苯并咪唑類藥物溶解度最小的正己烷。為保證部分水溶性較小的苯并咪唑類藥物組分在脫脂時(shí)的回收率，采用乙腈-0.1mol/L HCL-正己烷萃取脫脂。

試驗(yàn)中選擇了國(guó)內(nèi)外目前最常用的WATERSOasisMCX8固相萃取柱進(jìn)行試驗(yàn)，考慮到動(dòng)物樣品成分復(fù)雜，特別是動(dòng)物肝臟樣品較臟，為防止樣品過載導(dǎo)致回收率下降，選用了150mg/6mL的MCX柱。根據(jù)MCX柱的保留特性，應(yīng)在酸性條件下.上柱，使待測(cè)物呈陽(yáng)離子鍵合吸附，所以采用0.1mol/LHCL稀釋樣液上柱，保證樣品在柱上有強(qiáng)保留。

洗滌是除去不需要的組分或雜質(zhì)，所用溶劑的極性一般略強(qiáng)于或等于樣品溶劑的極性。試驗(yàn)結(jié)果表明酸性條件下用100%甲醇溶液洗滌SPE柱，組分無(wú)損失，故選用5 mL 0.1 mol/L HCL，5mL甲醇溶液作為洗滌溶劑。

氨水-乙腈溶液對(duì)于MCX固相萃取柱是強(qiáng)溶劑。試驗(yàn)中依次增加氨水含量的乙腈溶劑體系進(jìn)行洗脫試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明采用10%氨水乙腈作為洗脫試驗(yàn)液可保證所測(cè)組分的充分洗脫，同時(shí)進(jìn)行10%氨水乙腈洗脫液的體積淋洗試驗(yàn)，結(jié)果表明大于12mL時(shí)可以淋洗完全。最后選擇15mL 10%氨水乙腈溶液作為洗脫溶劑。

(3)儀器條件的優(yōu)化

試驗(yàn)了不同有機(jī)溶劑(甲醇、乙腈)對(duì)苯并咪唑分子的離子化影響，試驗(yàn)結(jié)果表明大部分苯并咪唑類藥物分子采用乙腈作為流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑時(shí)，較之采用甲醇作為流動(dòng)相能得到更強(qiáng)的質(zhì)譜信號(hào)，表明乙腈比甲醇更有利于苯并咪唑類分子的離子化。

根據(jù)文獻(xiàn)的描述，選定了16種苯并咪唑類驅(qū)蟲藥的二級(jí)質(zhì)譜產(chǎn)物離子各：二對(duì)共計(jì)三十二個(gè)，進(jìn)行質(zhì)譜離子源參數(shù)的優(yōu)化，包括電壓參數(shù)：去簇電壓(DP)，聚焦電壓(FP)，入口電壓(EP)，碰撞能(CE)、碰撞池出口電壓(CXP)，電離電壓(IS)；氣流參數(shù)：霧化氣(NEB)，氣簾氣(CUR)，輔助氣(AUX)，碰撞氣(CAD)；輔助氣溫度(TEM)。

研究了苯并咪唑類藥物的二級(jí)質(zhì)譜離子產(chǎn)生途徑，研究結(jié)果表明苯并咪唑類驅(qū)蟲藥的母核是一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的共軛體系，在通常的碰撞能量范圍內(nèi)(CE15-60V)較少發(fā)生開環(huán)重排反應(yīng)，苯并咪唑驅(qū)蟲藥的碰撞裂解反應(yīng)大部分是發(fā)生在取代基位置。苯并咪唑類藥物從結(jié)構(gòu)上可細(xì)分為氨基甲酸酯類和噻苯咪唑二個(gè)亞類，在所研究的十多種苯并咪唑類藥物和代謝物中，氨基甲酸酯類和噻苯咪唑類藥物的質(zhì)譜碎裂途徑各有其特點(diǎn)。根據(jù)十五課題的研究成果，選定了十六個(gè)苯并咪唑類藥物和代謝物的定性離子對(duì)。

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