咪唑駢噻唑類藥物測(cè)定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

18.1.4.2 測(cè)定方法

目前有關(guān)動(dòng)物源基質(zhì)中左旋咪唑的殘留檢測(cè)方法主要有快速檢測(cè)法和儀器檢測(cè)方法?？焖贆z測(cè)方法主要為生物傳感器法，儀器方法主要包括氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)高效液相色譜法(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等。

(1) 生物傳感器法(biosensor)

生物傳感器是以固定化的生物成分(如酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原)或生物體本身為敏感材料，與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)換能器相結(jié)合，用于快速檢測(cè)物理、化學(xué)、生物量的新型器件。與其他方法相比，其精密度高，可做到小型化、自動(dòng)化、方便現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。Crooks等報(bào)道了采用免疫生物傳感器測(cè)定牛肝臟和奶中左旋咪唑殘留的檢測(cè)方法。將左旋咪唑衍生為氨基左旋咪唑，并連接牛血清載體蛋白，制得純化抗原，并用其來(lái)制備兔多克隆抗體。將藥物衍生物固定在CM5傳感器芯片上，抗體可結(jié)合在傳感器芯片表面，從而得到檢測(cè)。反應(yīng)物在芯片表面能夠穩(wěn)定再生幾百次，單個(gè)分析過(guò)程(包括加樣、芯片再生和系統(tǒng)清洗)只需要6min就能完成。樣品采用乙腈提取，肝臟樣品需要額外的過(guò)濾，采用Biacore生物傳感器檢測(cè)。肝臟組織的LOD為6.8μg/kg，牛奶為0.5μg/L；肝臟在100μg/kg添加水平的CV為6.7%，牛奶在2μg/L添加水平的CV為2.4%。McGarrity等開(kāi)發(fā)了基于競(jìng)爭(zhēng)性化學(xué)發(fā)光免疫分析的生物芯片陣列試劑盒用于左旋咪唑等20多種驅(qū)蟲(chóng)藥物的篩選檢測(cè)。固體支持物和容器中的生物芯片包含的離散點(diǎn)的陣列，該法適用于半自動(dòng)臺(tái)式分析儀。左旋咪唑的LOD為2μg/L(牛奶)、6.5μg/kg(組織)；方法回收率在71%～135%之間。

(2)電化學(xué)發(fā)光分析法(electrochemiluminescence)

電化學(xué)發(fā)光分析法具有靈敏度高、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等特點(diǎn)，廣泛地應(yīng)用于生物、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、臨床、環(huán)境、食品、免疫和核酸雜交分析和工業(yè)分析等領(lǐng)域。Xiao等開(kāi)發(fā)了血清中左旋咪唑的電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法。該方法基于由Ru(bpy)3 2+引導(dǎo)的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)增強(qiáng)，在12mmol/L的硼酸緩沖液(pH9)中，該離子在鉑電極.上與左旋咪唑的叔胺基團(tuán)反應(yīng)。發(fā)光強(qiáng)度和左旋咪唑的濃度在0～1×10-7 mol/L之間呈良好線性，方法LOD為1.76×10-11 mol/L。

(3)氣相色譜法(gas chromatography，GC)

GC具有操作簡(jiǎn)單、分析速度快、高效能、高選擇性、高靈敏度、分析速度快和應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)已有采用GC檢測(cè)動(dòng)物組織中左旋咪唑殘留量的報(bào)道。

張叢蘭建立了豬、雞、羊可食用組織中左旋咪唑殘留的GC檢測(cè)方法。取勻質(zhì)樣品，KOH溶液堿化，乙酸乙酯提取，鹽酸溶液反萃取，KOH溶液中和酸，再用三氯甲烷萃取，取三氯甲烷層進(jìn)：樣分析。采用HP-6890氣相色譜儀，氮磷檢測(cè)器(NPD)，HP-5毛細(xì)管柱(30m×0.32mm)分離，氮?dú)鉃檩d氣，流速2mL/min。結(jié)果顯示，在0.05～3.2μg/mL時(shí)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R為0.9996；各組織中左旋咪唑的LOD為5μg/kg；在添加濃度為5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg時(shí)，各組織的回收率分別為：肌肉大于83.1%，肝臟大于81.4%，脂肪大于70.9%，腎臟大于81.8%；日內(nèi)、日間CV均小于12.5%。Casale等通過(guò)采用手性毛細(xì)管柱，開(kāi)發(fā)了GC-火焰離子化檢測(cè)器(FID)測(cè)定尿中左旋咪唑/右旋咪唑?qū)τ丑w的方法。

(4)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

HPLC是獸藥殘留定量、定性分析的有效手段，具有檢測(cè)靈敏度高、選擇性好、定性定量同時(shí)進(jìn)行、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。目前，動(dòng)物源基質(zhì)中左旋咪唑殘留檢測(cè)方法報(bào)道最多的就是HPLC方法，常用的檢測(cè)：器有紫外檢測(cè)器(UVD)和二極管陣列檢測(cè)器( PDA/DAD)等。

曾勇等建立了豬、雞組織中左旋咪唑殘留的HPLC-UVD檢測(cè)方法。樣液經(jīng)混合型陽(yáng)離子固相萃取小柱凈化后，采用Agilent TC-C18(5um，250mm×4.6mm i.d.)色譜柱分離，流動(dòng)相由0.02mol/L磷酸二氫鈉-二乙胺緩沖液和乙腈按體積比7：3比例配制，HPLC在220nm波長(zhǎng)處測(cè)定，外標(biāo)法定量。左旋咪唑的保留時(shí)間為12～13min；在10～1000μg/L時(shí)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r為0.9999；在肌肉、脂肪和腎臟中的LOD為2μg/kg，LOQ為5ug/kg；在肝臟中LOD為2μg/kg，LOQ為10μg/kg；在不同添加濃度水平下，平均回收率在70%～110%之間，批內(nèi)CV在10%以內(nèi)，批間CV在15%以內(nèi)。Tyrpenou等建立了綿羊肌肉組織中左旋咪唑殘留的HPLC-PDA檢測(cè)方法。采用乙酸乙酯提取并LLP凈化，氫氧化鉀堿性溶液條件下再用氯仿二次提取。采用Zarbax SB-C18色譜柱

分離，柱溫50℃，流動(dòng)相為體積分?jǐn)?shù)0.1%的三氟乙酸(pH2.0)和乙腈-甲醇(3+2，v/v)按體積比30：70的比例配制而成，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。在1/2倍、1倍、2倍和4倍MRL添加濃度的平均回收率為75.65%±2.74%，CV為10.4%；LOD和LOQ分別為2.0ug/kg和5.0μg/kg。

用該方法測(cè)定腎臟、肝臟和脂肪組織中左旋咪唑殘留，平均回收率分別為70.25%±1.07%、72.37%±3.6%和69.44%+2.22%，CV分別為1.52%、4.97%和3.19%。坂本美穗等也建立了畜產(chǎn)品中左旋咪唑殘留的HPLC檢測(cè)方法。用堿性乙酸乙酯提取牛、豬、禽的肌肉、肝、腎和脂肪組織中的左旋咪唑，并用0.1mol/L鹽酸溶液反萃取，提取液采用SCX柱凈化，HPLC檢測(cè)。色譜柱為ODS-80Ts(4.6mm×150mm，5um)，流動(dòng)相為0.02mol/L KH2PO4-二乙胺(299+1，v/v，pH7.5)與乙腈按體積比7：3混合，流速1.0mL/min，柱溫40℃，PDA檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，進(jìn)樣量20uL。該方法LOD為5μg/kg，平均回收率在78.3%～99.8%之間。

林維宣等建立了牛乳中左旋咪唑殘留量的HPLC測(cè)定方法。采用Spherisorh C18 色譜柱分離，流動(dòng)相由甲醇、0.05mol/L磷酸緩沖液、二乙胺按體積比70：30：1比例配制而成，流速0.8mL/min，UVD在230nm處檢測(cè)，外標(biāo)法定量。該方法LOD為10ug/kg；在添加10ug/kg、50μg/kg、2000μg/kg時(shí)，方法回收率為80.1%～84.2%，CV為7.2%～9.6%。De Ruyck等建立了牛奶中左旋咪唑等驅(qū)蟲(chóng)藥殘留的HPLC檢測(cè)方法。采用離子對(duì)液相色譜，色譜柱為Alltimna C18(5um， 150mm×3.2 mm i.d.)，以0.01 mol/L 1-辛烷磺酸鈉離子對(duì)試劑(正磷酸調(diào)pH3.0)-甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，DAD檢測(cè)，左旋咪唑檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm。該方法平均回收率在68%～85%之間，左旋咪唑LOD為0.5μg/L，LOQ為1.4μg/L，CV為12.7%。

El-Kholy等建立了測(cè)定雞蛋和d血漿中左旋咪唑的HPLC-UVD檢測(cè)方法。以Luna8 C18(150mm×4.6mm i.d，5μm)作為色譜分離柱，2%乙酸水溶液-甲醇(50+50，v/v)作為流動(dòng)相，同時(shí)加入低UV反應(yīng)的庚烷磺酸鈉(Pic-B7)離子對(duì)化合物，并用氫氧化銨調(diào)節(jié)pH7.31，流速為1.0mL/min，波長(zhǎng)225nm處檢測(cè)，以甲基左旋咪唑作為內(nèi)標(biāo)定量。該方法的LOD均為1μg/kg(L)；血漿的LOQ為3ug/L，其他組織為25μg/kg。Chiadmi等報(bào)道了血漿中左旋咪唑的HPLC分析方法。采用C18色譜柱分離，磷酸鹽緩沖液-乙腈溶液等度洗脫，DAD在235nm測(cè)定。該方法在50～2000ng/mL范圍呈良好線性，LOQ為28ng/mL，日內(nèi)和日間CV均小于7%。

上一篇：咪唑駢噻唑類藥物殘留分析技術(shù)——凈化方法

下一篇：咪唑駢噻唑類藥物測(cè)定方法（二）

食品安全檢測(cè)服務(wù)聯(lián)系電話：13613841283

標(biāo)簽:

食品安全網(wǎng) ：https://www.food12331.com

上一篇：咪唑駢噻唑類藥物測(cè)定方法（二）

下一篇：返回列表