硫脲嘧啶類藥物殘留分析技術(shù)——熒光檢測衍生化

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

2)熒光檢測衍生化

Perez-Ruiz等在強堿條件下用5-碘代乙酰胺基熒光素(5-iodoacetamidofluorescein，5-IAF)對硫脲嘧啶類藥物進行衍生化反應，產(chǎn)生熒光物質(zhì)后(圖19-5)，采用激光介導的熒光檢測器(LIFD)檢測。作者對硼酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液和磷酸鹽緩沖液在pH8.0～13.0條件下的衍生化效率進行比較發(fā)現(xiàn)，硫脲嘧啶、苯基硫脲嘧啶衍生物的熒光強度均隨著pH的增高而增強，并且沒有觀測到平高線。選擇pH 12.5作進一步研究，發(fā)現(xiàn)硼酸鹽緩沖液對硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶的衍生化最佳。接著對50～500mmol/L濃度的硼酸鹽緩沖液進行比較，300mmol/L硼酸鹽緩沖液對兩種分析物的衍生效果最佳。作者還對25μL衍生化試劑5-IAF在1×10-3～1mmol/L濃度范圍的衍生化效率進行了比較，當5-IAF濃度超過0.45mmol/L后，衍生化效率隨著濃度的增加而降低(圖19-6)。同時，25μL 4mmol/L的5-IAF具有較低的背景值。衍生反應30min后，兩種分析物的峰強度開始緩慢下降。此時衍生化效率接近42%。

圖19-4 Cu(I)催化的發(fā)光氨與雙氧水之間的化學發(fā)光反應示意圖

圖19-5 5-IAF與硫脲嘧啶類藥物衍生化反應示意圖

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