IDA-殼聚糖金屬螯合吸附劑

[db:作者] / 2023-01-05 00:00

IDA-殼聚糖金屬螯合吸附劑

固定化金屬親和層析法(Immobilized Metal AffinityChromatography,簡(jiǎn)稱IMAC)具有螯合介質(zhì)吸附容量大，選擇性及通用性較好，易于再生，成本低等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為分離純化蛋白質(zhì)等生物工程產(chǎn)品最有效的技術(shù)之一。隨著基因工程的發(fā)展，通過(guò)基因融合表達(dá)策略可大量制備N-端或C-端融合了6個(gè)組氨酸的目標(biāo)重組蛋白質(zhì)。

固定化金屬親和吸附劑是固定化金屬親和層析成功的關(guān)鍵。殼聚糖是來(lái)源豐富的環(huán)境可再生資源，具有良好的生物相容性。將殼聚糖用作蛋白質(zhì)分離純化和酶固定化基質(zhì)材料具有很好的應(yīng)用前景。王曉軍選用殼聚糖為基質(zhì)載體、戊二醛為交聯(lián)劑、環(huán)氧氯丙烷為活化劑、亞氨基二乙酸(IDA)為螯合配基制備金屬螯合親和吸附劑，研究了制備過(guò)程中各因素對(duì)吸附劑吸附性能的影響。

殼聚糖載體親和吸附劑的制備：

①交聯(lián)。稱取一定量殼聚糖，加入1% (體積分?jǐn)?shù))的CH3COOH溶液，攪拌至完全溶解。滴入一定量戊二醛，攪拌交聯(lián)4h。在快速攪拌下加入2mol/L的NaOH溶液，將pH值調(diào)至8.0附近，使殼聚糖呈顆粒狀沉淀。收集沉淀，水洗至中性，加入NaOH攪拌還原40min，水洗至中性，抽濾。

②活化。取一定量交聯(lián)殼聚糖加入一定比例和濃度的NaOH與二甲亞砜(DMSO)的混合溶液中。充分?jǐn)噭颍?5℃下緩慢滴加1.2mL體積比為0.3的環(huán)氧氯丙烷，升溫至40℃，170r/min下振蕩反應(yīng)一段時(shí)間，用大量水洗至中性，濾干。

③螯合配基的鍵合。取13.31gIDA，8gNaOH溶解至100mL，向活化后的交聯(lián)殼聚糖中加入一定體積后定容至50 mL，在恒溫振蕩器中于一定溫度反應(yīng)一段時(shí)間。洗滌至中性，用布氏漏斗抽干，得殼聚糖螯合凝膠。

④取螯合凝膠裝柱(1. 3cm×15cm)，用0.1mol/L的CuSO4溶液灌流，凝膠柱螯合銅離子至飽和后用0.05mol/L，pH值為7.5的Tris.HCI緩沖液清洗，可得到鰲合銅離子的親和吸附劑，然后再測(cè)定一些因素對(duì)其的影響。

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