大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和林可胺類(lèi)藥物殘留分析技術(shù)前處理方法——提取

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

6.1.4.1 前處理方法

(1)提取

1)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)

MALs呈弱堿性，微溶于水，在水溶液中-般容易分解，尤其是在酸性條件下更不穩(wěn)定。常用的提取試劑有甲醇、乙腈、乙醚，以及偏磷酸-甲醇、Tris緩沖溶液、MCI-Vain-EDTA緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液等混合溶劑和緩沖溶液。

趙東豪等凹采用乙腈提取豬肉中的MALs，再用正已烷脫脂，C18柱凈化，4%氨化甲醇洗脫后，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行定量和定性分析。替米考星和吉他霉素的檢測(cè)限(LOD)為0.1μg/kg，紅霉素、泰樂(lè)菌素、羅紅霉素和交沙霉素為0.05μg/kg；6種藥物在50μg/kg、100μg/kg和200μg/kg添加水平上，回收率均在62.2%～102%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在2.7%～16%之間。Hammel等以建立了蜂蜜中包括8種MALs等42種獸藥的多殘留檢測(cè)方法。主要采取液液萃取(LLE)的方法進(jìn)行藥物的提取，嘗試了四種不同萃取溶劑(乙腈、TCA+乙腈、NFPA+乙腈、酸性水解后加入乙腈)，并應(yīng)用超聲提取方法進(jìn)行樣品處理，通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較，不同類(lèi)藥物的萃取效果差別較大，但實(shí)驗(yàn)表明，乙腈對(duì)于MALs的萃取是十分有效的。Croteau等比較了一些溶劑對(duì)血漿和肝臟樣品中ERM的萃取效率，包括氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、異戊醇-正已烷、叔丁基甲醚、乙醚和正已烷。結(jié)果表明叔丁基甲醚和乙醚萃取的回收率最高，共萃取雜質(zhì)最少。

Horie等用0.3%偏磷酸～甲醇(7+3，v/v)提取，高效液相色譜(HPLC)法同時(shí)檢測(cè)肉中5種MALs。添加濃度1.0μg/g水平上的回收率為70.8%～90.4%，LOD為0.05μg/g。李存等問(wèn)建立了豬組織中替米考星殘留的檢測(cè)方法。用乙腈和磷酸二氫鉀緩沖液提取，然后進(jìn)行固相萃取柱凈化，HPLC檢測(cè)。肌肉和肝臟的LOD分別為0.01μg/g和0.025ug/g，定量限(L0Q)分別為0.02μg/g和0.05ug/g；肌肉在0.02～2.0μg/g添加范圍內(nèi)，平均回收率在84.2%～96.6%之間，變異系數(shù)(CV)在5.0%～8.2%之間；肝臟在0.05～5.0ug/g添加范圍內(nèi)，平均回收率在82.0%～92.8%之間，CV在5.8%～1.3%之間。Draisci等用磷酸鹽緩沖液氯仿提取牛肉、牛肝和牛腎中的MALs。樣品中加入2mL磷酸緩沖液和10mL氯仿渦旋振蕩，離心，收集氯仿層，經(jīng)固相萃取凈化后，LC-MS/MS檢測(cè)。該方法泰樂(lè)菌素的回收率為83%～90%，替米考星為82.5%～89%，紅霉素為80.4%～86.3%，RSD均低于14.9%。

Dubois等用pH10.5的tris緩沖液提取肉、腎、肝以及雞蛋、牛奶中的5種MALs，用鎢酸鈉沉淀蛋白，固相萃取柱凈化，最后LC-MS/MS分析。在添加濃度0.5～2MRL時(shí)，回收率為80%～110%，RSD為2%～13%。夏敏等采用MCI-Vain-EDTA緩沖溶液提取肉中5種MALs，提取液通過(guò)C18固相萃取柱凈化，LC-MS/MS測(cè)定。方法回收率約為50%～60%。

2)林可胺類(lèi)

林可胺類(lèi)藥物常用的提取溶劑--般為碳酸鹽緩沖液和乙腈等。

徐錦忠等建立了蜂蜜中林可霉素和氯林可霉素的殘留檢測(cè)方法。樣品用0.1mol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液(pH9.0)提取，經(jīng)固相萃取凈化，氮?dú)獯蹈蓾饪s，甲醇-水(30+70，v/v)復(fù)溶后，LC-MS/MS測(cè)定。兩種抗生素的LOD為0.1μg/kg，LOQ為0.5μg/kg；在1.0～200μg/L濃度范圍線(xiàn)性良好(r2>0.996)；在1.0μg/kg、5.0μg/kg、20.0μg/kg添加水平，兩種抗生素的平均回收率為80%～110%，日內(nèi)測(cè)定結(jié)果的RSD小于8%，日間小于15%。趙明等用碳酸鹽緩沖液(pH9.0)提取蜂蜜中的林可霉素，用C18固相萃取柱凈化，甲醇和乙腈洗脫，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解后，用HPLC測(cè)定。樣品平均回收率為93.02%±1.22%，日內(nèi)CV為0.54%～1.58%，日間CV為0.27%～1.49%，方法LOD為0.1ug/mL。

3)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和林可胺類(lèi)

跨種類(lèi)藥物殘留分析，特別是在提取過(guò)程中，需要綜合考慮藥物理化性質(zhì)，盡量選擇適用性強(qiáng)的溶劑。在MALs和林可胺類(lèi)藥物殘留的同時(shí)分析中，最為常用的溶劑是乙腈，而且必要時(shí)可以采用加壓溶劑萃取(PLE)等輔助手段來(lái)提高萃取效率。

孫雷等建立了動(dòng)物源食品中林可霉素、克林霉素、吡利霉素、紅霉素、泰樂(lè)菌素、螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、吉他霉素、克拉霉素、阿奇霉素、羅紅霉素和交沙霉素等13種林可胺類(lèi)和MALs殘留檢測(cè)的超高效液相色譜(UPLC)-MS/MS方法。組織樣品經(jīng)乙腈提取，無(wú)水硫酸鈉脫水，離心后，收集上清液，用正己烷去除脂肪等雜質(zhì)，然后用UPLC-MSMS檢測(cè)。13種藥物在5～200μg/L濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.990；13種藥物在動(dòng)物組織中的LOD均為1μg/kg，LOQ均為2.5μg/kg；在2.5ug/kg、25μg/kg、100μg/kg濃度水平，13種藥物的回收率為72%～104%，批內(nèi)批間RSD為4.8%～14.3%。Juan等采用PLE提取肉和牛奶中5種MALs和2種林可霉素類(lèi)藥物。2.5mL(或2.5g)樣品中加入11g的海沙和0.5g EDTA，充分混合之后，裝入不銹鋼提取池，在末端進(jìn)行纖維薄膜過(guò)濾器的密封。PLE的溫度為40℃，壓力為1500psi。第一個(gè)循環(huán)用100%的乙腈提取，25%的流量，然后是10min的靜電期，獲得的提取液用石油醚進(jìn)行脫脂，離心后進(jìn)行濃縮，乙腈復(fù)溶后，LC-MS/MS檢測(cè)。該方法完全滿(mǎn)足歐盟殘留檢測(cè)的要求。Jimenez等建立了雞蛋中41種藥物(包括大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和林可胺類(lèi))的殘留分析方法。以乙腈琥珀酸緩沖液(1+1，v/v)作為提取液，PLE在70℃、1500psi下提取，靜電循環(huán)為3min，在同樣的溫度和壓力下補(bǔ)加一定量的提取液之后，進(jìn)行第二個(gè)循環(huán)。收集所有提取液，濃縮后，復(fù)溶，UPLC-MS/MS分析。該方法的錯(cuò)誤率控制在10%以?xún)?nèi)，重復(fù)性RSD均在10%～20%之間。

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