液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留樣品前處理

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

7.2.1.5 樣品前處理

(1)豬肉、牛肉、雞肉、豬肝、魚類、蝦蟹類和貝類樣品

1)試樣制備

實(shí)驗(yàn)室樣品用組織搗碎機(jī)絞碎，分出0.5kg作為試樣。試樣置于-18℃冰柜，避光保存。

2)樣品稱取和脫脂

稱取樣品2g(精確到0.01g)，置于50mL棕色離心管中，加入10mL甲醇-水混合溶液(2+1，v/v)，均質(zhì)1min，再用5mL甲醇-水混合溶液洗滌均質(zhì)器刀頭，二者合并4000r/min離心5min，吸取上清液棄掉。向每個(gè)離心管中加入適量混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，使四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)物最終測(cè)定濃度均為2.0ng/mL。

3)水解和衍生化

向上述離心管中加入10mL 0.2mol/L鹽酸溶液均質(zhì)1min，用10mL 0.2mol/L鹽酸溶液洗滌均質(zhì)器刀頭，二者合并后加入0.3mL衍生劑，用液體混勻器混勻，置于37℃恒溫振蕩水浴中避光反應(yīng)16h。

4)凈化

上述衍生溶液放置至室溫后，加入5mL 0.1mol/L磷酸氫二鉀溶液，用1mo/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH約為7.4，4000r/min離心10min，上清液(若待測(cè)樣品含脂肪較多，上清液加5mL正已烷，振蕩2min，4000r/min離心10min吸取并棄掉正己烷)倒入下接OasisHLB固相萃取柱的貯液器中，在固相萃取裝置上使樣液以小于2mL/min的流速通過OasisHLB柱，待樣液全部通過固相萃取柱后用10mL水洗滌固相萃取柱，棄去全部流出液。用真空泵在65kPa負(fù)壓下抽干OasisHLB固相萃取柱15min。用5mL乙酸乙酯洗脫被測(cè)物于25mL棕色離心管中，使用氮?dú)獯蹈蓛x，在40℃水浴中吹干，用樣品定容液溶解并定容至1.0mL，混勻后過0.2um濾膜用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

5)混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)溶液的制備

稱取五個(gè)陰性樣品，每個(gè)樣品為2g(精確到0.01g)，置于50mL棕色離心管中，加入10mL甲醇-水混合溶液(2+1，v/v)，均質(zhì)1min，再用5mL甲醇-水混合溶液洗滌均質(zhì)器刀頭，二者合并4000r/min離心5min，吸取上清液棄掉。分別加入適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成四種硝基呋喃代謝物含量均為0.5μg/kg、1.0μg/kg、2.0μg/kg、4.0μg/kg和8.0μg/kg的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別加入適量混合內(nèi)標(biāo)溶液，含量均為2.0ng/mL。其他按照樣品的水解衍生化和凈化步驟操作。

(2)牛奶或奶粉樣品

1)試樣制備

實(shí)驗(yàn)室樣品混合均勻，分出0.5kg作為試樣。試樣置于-18℃冰柜，避光保存。

2)牛奶樣品脫蛋白、水解和衍生化

稱取牛奶樣品8g(精確到0.01g)，置于50mL棕色離心管中，加入15mL三氯乙酸溶液。向上述離心管中加入0.2mL衍生劑，再加入適量混合內(nèi)標(biāo)溶液，使四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)物最終定容濃度均為2.0ng/mL。用液體混勻器混勻，置于37℃恒溫振蕩水浴中避光反應(yīng)16h。離心管取出后放置至室溫，在10000r/min下離心10min，上清液倒入另-棕色離心管中。

3)奶粉樣品脫蛋白、水解和衍生化

稱取奶粉樣品1g(精確到0.01g)，置于50mL棕色離心管中，加入8mL水，渦旋混合后，再加入15mL三氯乙酸溶液。向上述離心管中加入0.2mL衍生劑，再加入適量混合內(nèi)標(biāo)溶液，使四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)物最終定容濃度均為2.0ng/mL。用液體混勻器混勻，置于37℃恒溫振蕩水浴中避光反應(yīng)16h。離心管取出后放置至室溫，在10000r/min下離心10min，上清液倒入另一棕色離心管中。

4)樣品溶液凈化

上述衍生溶液加入5mL 0.1mol/L磷酸氫二鉀溶液，用4mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH約為7.4，在10000r/min下離心10min，上清液倒入下接OasisHLB固相萃取柱的貯液器中，在固相萃取裝置上使樣液以小于2mL/min的流速通過OasisHLB固相萃取柱，待樣液全部通過固相萃取柱后用20mL 20%甲醇水淋洗固相萃取柱，棄去全部流出液。抽干OasisHLB固相萃取柱15min。用5mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于25mL棕色離心管中，在氮?dú)獯蹈蓛x上45℃水浴吹干，準(zhǔn)確加入1.0mL樣品定容溶液溶解殘?jiān)?，混勻后過0.2um濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

5)牛奶混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)溶液的制備

稱取五個(gè)陰性牛奶樣品，每個(gè)樣品為8g(精確到0.01g)。分別加入適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成四種硝基呋喃代謝物含量均為0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.5μg/kg、1.0μg/kg和2.0μg/kg的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別加入適量混合內(nèi)標(biāo)溶液，含量均為2.0ng/mL。其他按樣品的水解衍生化和凈化步驟操作。

6)奶粉混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)溶液的制備

稱取五個(gè)陰性奶粉樣品，每個(gè)樣品為1g(精確到0.01g)。分別加入適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成四種硝基呋喃代謝物含量均為0.8μg/kg、1.6μg/kg、4.0μg/kg、8.0μg/kg和16.0μg/kg的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別加入適量混合內(nèi)標(biāo)溶液，含量均為2.0ng/mL。其他按樣品的水解衍生化和凈化步驟操作。

(3)蜂蜜樣品

1)試樣制備

對(duì)無結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品，將其攪拌均勻。對(duì)有結(jié)晶的樣品，在密閉情況下，置于不超過60℃的水浴中溫?zé)?，振蕩，待樣品全部融化后攪勻，迅速冷卻至室溫。分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中，密封，并做上標(biāo)記。將試樣于常溫下保存。

2)水解和衍生化

稱取4g試樣(精確到0.01g)于50mL棕色離心管中，加入5mL 0.2mol/L鹽酸溶液和0.15mL衍生劑，渦旋混合1min，置于37℃恒溫箱中保持16h。

3)凈化

將上述衍生溶液取出放置至室溫，加入3mL 0.1mol/L磷酸氫二鉀溶液，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH約7.4，倒入下接OasisHLB固相萃取柱的貯液器中，在固相萃取裝置上使樣液以小于2mL/min的流速通過OasisHLB柱，待樣液全部通過固相萃取柱后用6mL水洗固相萃取柱，棄去全部流出液。用真空泵在65kPa負(fù)壓下抽干OasisHLB固相萃取柱10min。再用4mL乙酸乙酯洗脫被測(cè)物，洗脫液全部收集于25mL棕色離心管中，并在氮?dú)獯蹈蓛x上40℃水浴吹干，1mL樣品定容液定容。定容液混勻后過0.45um濾膜，濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

4)混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)溶液的制備

稱取五個(gè)陰性樣品，每個(gè)樣品為4g(精確到0.01g)，置于50mL棕色離心管中，分別加入適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成四種硝基呋喃代謝物含量均為0.2μg/kg、0.5μg/kg、1.0ug/kg、2.0μg/kg和8.0μg/kg的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別加入適量混合內(nèi)標(biāo)溶液，含量均為2.0ng/mL。其他按照樣品的水解衍生化和凈化步驟操作。

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