鎮(zhèn)靜劑類藥殘留分析技術(shù)——凈化方法（三）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

3)固相微萃取( solid phase microextraction，SPME)

SPME技術(shù)是一種相對(duì)較新的樣品處理技術(shù)，可在線進(jìn)行色譜分析?；|(zhì)(氣體和液體)中的待測(cè)物萃取后吸收進(jìn)入一種比毛細(xì)管厚的薄層硅膠樹(shù)脂，然后用液相或氣相的方法轉(zhuǎn)移待測(cè)物進(jìn)入液相或氣相色譜分析，提高凈化效率，減小溶劑污染。

Queiroz等應(yīng)用SPME同時(shí)凈化測(cè)定血漿中苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平、卡馬西平環(huán)氧化物、拉莫三嗪和撲米酮等6種藥物。優(yōu)化后萃取條件為： 1.0 mL血漿用15%氯化鈉和3 mL磷酸鉀緩沖液(pH 7.0)改性， 65 mm聚乙二醇二乙烯基苯纖維于30℃萃取30 min， 2500 r/min攪拌15 min。GC-MS測(cè)定，線性范圍為0.05 ～40.0 μg/mL，血漿樣品LOQ為0.05 ～0.20 μg/mL，回收率為90%～ 144%，cV為3.22%～7.73%。Mullett 等應(yīng)用限性介質(zhì)材料(RAM)和烷基化二醇硅(ADS) 作SPME毛細(xì)管，自動(dòng)化直接提取血清中的多種苯二氮卓類藥物。方法線性范圍為50～ 50000 ng/mL，血清中奧沙西泮、替馬西泮、去甲西泮和地西泮的LOD分別為26 ng/mL、29 ng/mL、22 ng/mL和24 ng/mL，回收率為97.1%～98.0%。Oliveira 等建立了SPME-GC-MS方法測(cè)定血漿中的地西泮。SPME程序：用聚二甲硅氧烷纖維(膜厚度100 um)直接萃取，250 μL血漿加入10%氯化鈉溶液，4.25 mL磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，pH 6.9)改性，萃取溫度55℃，磁力攪拌器轉(zhuǎn)速2500 r/min，萃取時(shí)間30 min，然后在GC進(jìn)樣口250℃解吸附10 min。方法LOQ為10.0 ng/mL，CV小于14.0%，回收率大于80%。Reubsaet等應(yīng)用SPME-GC方法分析尿和血漿中的奧沙西泮、地西泮、去甲基西泮、氟硝西泮和阿普唑侖。萃取條件：正辛醇包被固定在聚丙烯酸酯纖維作用4 min，將萃取纖維置于樣品(pH 6.0)中萃取15min。尿液樣品加入0.3g/mL氯化鈉后再萃取，血漿樣品宜先沉淀蛋白后再萃取，但血漿回收率低于尿液，回收率為93%～ 11%，尿液樣品的LOD為0.01 ～0.45 umol/L，血漿樣品LOD為0.01 ～0.48 umol/L。Aresta 等建立了SPME-HPLC測(cè)定尿液中地洛西泮的方法。13.5 mL尿液加入1.5 mL 磷酸鹽緩沖液(0.5 mol/L， pH 9.7)， 直接SPME 30 min，然后轉(zhuǎn)入乙腈-水(40+60，v/v) 靜態(tài)解析附3 min，最后將萃取針暴露于流動(dòng)相4s，完成上樣。研究比較了聚乙二醇和聚二甲基硅氧烷/二乙烯苯兩種萃取模板，發(fā)現(xiàn)后者更適合該藥物的分析。方法LOD為5 ng/mL， LOQ為27 ng/mL，回收率為90%，CV 為6.%±0.5%。

4)液相微萃取(liquid phase microextraction，LPME)

以LLE為基礎(chǔ)的LPME技術(shù)克服了傳統(tǒng)LLE的諸多不足，僅使用微升甚至納升級(jí)的有機(jī)溶劑即完成萃取分析，具有消耗有機(jī)溶劑少、省去所需相分離及合并過(guò)程、富集倍數(shù)大、可實(shí)現(xiàn)聯(lián)用化、樣品用量少等優(yōu)點(diǎn)。

Ugland等用LPME結(jié)合GC分析尿和血漿中的地西泮及其主要代謝物(去甲地西泮)。微萃取裝置包括多孔空心的聚丙烯纖維管、兩根穿過(guò)隔膜的導(dǎo)引針和4 mL小瓶。充滿萃取液的中空纖維管浸入樣品液中，帶有預(yù)濃縮待測(cè)物的萃取溶劑1 μL直接注入毛細(xì)管GC中進(jìn)行分析。30 個(gè)樣品可同時(shí)在振蕩器中進(jìn)行提取，具有較好的樣品處理能力。應(yīng)用氮磷檢測(cè)器(NPD)進(jìn)行檢測(cè)，LOD可達(dá)到0.02 mmol/mL和0.115 mmol/mL；血液中地西泮和去甲地西泮LOQ為0.08 nmol/mL和0.38 nmol/mL，尿液中去甲地西泮LOQ分別為0.07 nmo/mL；回收率為84%～ 102%，CV 為3.5%～ 6.6%。

5)分子印跡技術(shù)(molecular imprinting technique， MIT)

MIT是將與模板分子結(jié)合的功能單體與交聯(lián)試劑共聚，形成人工模擬抗體的高選擇性和識(shí)別性的印跡聚合物。

Ariffin等應(yīng)用甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯制備了地西泮的分子印跡聚合物(MIP)，用于提取、凈化毛發(fā)中的苯二氮卓類藥物。MIPs制備過(guò)程如下：溶解地西泮、乙二醇二甲基丙烯酸酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯于不含氯仿的乙醇中，加入偶氮二異丁腈，完全溶解后氮吹5 min，冰浴冷卻，在4℃恒溫以便于形成模板單體復(fù)合物，長(zhǎng)波紫外線燈輻照24h后，將聚合物轉(zhuǎn)移到60℃水浴24h，完成聚合物固化。以相同的方式但無(wú)模板(地西泮)制備非印跡聚合物(NIP)。 將MIP和NIP碾碎，過(guò)篩至25～38um大小，用甲醇-乙酸(9+1，v/v)將模板從聚合物顆粒徹底洗脫，真空干燥備用。將20 mg MIP裝SPE小柱，作分子印跡固相萃取(MISPE)凈化。用甲醇-25%氫氧化銨水溶液(20+1，v/v)超聲提取頭發(fā)中地西泮1h，室溫過(guò)夜，將提取液蒸發(fā)，用甲苯復(fù)溶，過(guò)MISPE小柱，用乙酸-乙腈(15+85，v/v)洗脫。MISPE 結(jié)合容量為110 ng/mg (地西泮/聚合物)，回收率為93%，RSD為1.5%，LOD 和LOQ分別為0.09 ng/mg和0.14 ng/mg。

6)免疫親和固相微萃取(immunoaffinity solid phase microextraction)

免疫親和固相微萃取與SPME原理相似，在微萃取小柱上包被待測(cè)物特異性抗體，這樣萃取小柱可選擇性地提取待測(cè)溶液中的藥物，只不過(guò)這種選擇性萃取是基于抗原抗體相互吸引的作用力，而不是基于物質(zhì)的理化性質(zhì)相互作用。

Lord等建立 了測(cè)定苯二氮卓類藥物的免疫親和固相微萃取探針。將相應(yīng)抗體以共價(jià)鍵固定在玻璃纖維上，抗體與藥物親和常數(shù)為109～1010/mol， LOD為0.001 ～0.015 ng/mL，但未對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行測(cè)定。

7) QuEChERS (Quick， Easy， Cheap， Effective， Rugged， Safe)

QuEChERS是在MSPD技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)的快速樣品前處理技術(shù)。其步驟可概括為：樣品粉碎；溶劑提取分離；加入MgSO4等鹽類除水；加入乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)等吸附劑除雜；上清液進(jìn)行分 析等五個(gè)步驟。

Usui等建立了QuEChERS凈化，同時(shí)測(cè)定血液中苯二氮卓類及其代謝物、巴比妥類、吩噻嗪類的分析方法。前處理分為萃取和分散固相萃取兩步：基質(zhì)中加入硫酸鎂和乙酸鈉，不銹鋼珠振蕩提?。惶崛∫弘x心后，上層乙腈層用C18、仲二胺和硫酸鎂作分散固相萃取凈化，離心后的上清液用LC-MSMS分析。方法LOD為0.04～4.43 μg/L，LOQ為1～14.7μg/L，回收率為39%～127%，日內(nèi)和日間CV分別在0.5%～12.7%、1.5%～16.6%之間。渠巖等采用QuEChERS技術(shù)建立了畜禽肉中阿普唑侖、咪達(dá)唑侖、三唑侖、艾司唑侖、奧沙西泮、地西泮、硝西泮、氯硝西泮、卡馬西平、利多卡因、苯巴比妥、異戊巴比妥和司可巴比妥等13 種鎮(zhèn)靜藥物殘留量的分析方法。稱取禽畜肉15.0g于50 mL Dis QuE提取管中，加入15 mL 1%乙酸乙腈溶液，渦旋振蕩5 min， 再離心，吸取7.5 mL乙腈提取液至15 mL DisQuE清除管(含有150 mg C18)中，渦旋振蕩30s，離心吸取100 μL上清液加入900 μL 10%甲醇，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS) 分析。13 種鎮(zhèn)靜藥物的LOD為0.05～3 μg/kg，回收率為77.4%～ 100.2%，RSD為1.3%～ 14.8%。

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