液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛和豬肌肉中安乃近代謝物殘留量

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

14.2.1.1 適用范圍

適用于牛和豬肌肉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。方法檢出限：4-甲酰氨基安替比林為1.8μg/kg；4-氨基安替比林和4-甲基氨基安替比林為1.5 ug/kg；4-乙酰氨基安替比林為1.0ug/kg。

14.2.1.2 方法原理

肌肉中安乃近代謝物殘留用硫酸鈉溶液(pH=7)提取，過(guò)濾后，經(jīng)Bond Elut C18固相萃取柱或相當(dāng)者凈化后，用甲醇洗脫，氮?dú)獯蹈?。殘?jiān)眉状?水溶解，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法定量。

14.2.1.3 試劑和材料

甲醇、乙腈、醋酸銨：色譜純；硫酸鈉、亞硫酸鈉：分析純。

硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液：準(zhǔn)確稱取14.20g無(wú)水硫酸鈉和2.52g亞硫酸鈉，用水溶解，并使其體積達(dá)到約950mL，然后用0.5mol/L的稀硫酸調(diào)節(jié)溶液的pH至7.0，用水定容至1000mL；淋洗液：甲醇+水(1+19，v/v)；樣品定容液：甲醇+水(1+9，v/v)。

4-甲基氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%。

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：4-異丙基氨基安替比林，純度≥99%。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：100mg/L。準(zhǔn)確稱取適量的各種安乃近代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配制成濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，避光-18℃保存，可使用3個(gè)月。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1.0mg/L。吸取每種適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋成1.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，避光-18℃保存，可使用1個(gè)月。

內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取適量的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇配制成濃度為100mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，遇光-18℃保存，可使用3個(gè)月。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1.0mg/L。吸取每種適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋成1.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，避光-18℃保存，可使用1個(gè)月。

內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取適量的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇配制成濃度為100 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，避光-18℃保存，可使用3個(gè)月。

內(nèi)標(biāo)工作溶液：0.20mg/L。吸取適量的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋成0.20mg/mL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，避光-18℃保存，可使用1個(gè)月。

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：吸取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和適量?jī)?nèi)標(biāo)工作溶液，用空白樣品提取液配成濃度為1.0μg/L、5.0μg/L、10.0ug/L、20.0μg/L、40.0ug/L和內(nèi)標(biāo)濃度為0.20mg/L的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。當(dāng)天配制。

Bond Elut C18固相萃取柱或相當(dāng)者：500mg，3mL。用前分別用5mL甲醇和5mL水處理，保持柱體濕潤(rùn)。

14.2.1.4儀器和設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)；固相萃取裝置；氮?dú)鉂饪s儀；旋渦混勻器；分析天平：感量0.1mg和0.01g；真空泵；均質(zhì)器；移液器：10～100μL和100～1000μL；聚丙烯離心管：50mL，具塞；pH計(jì)：測(cè)量精度±0.02；低溫離心機(jī)：可制冷到4℃；玻璃離心管：15mL。

14.2.1.5樣品前處理

(1)試樣制備

取有代表性的牛或豬肌肉組織，制成實(shí)驗(yàn)室樣品。試樣分為兩份，置于樣品瓶中，密封，并做上標(biāo)記。制備好的試樣置于-18℃冰柜中避光保存。

(2)提取

稱取5g試樣，精確至0.01g。將上述樣品置于50mL聚丙烯離心管中，加入0.25mL濃度為2.0mg/L的內(nèi)標(biāo)工作溶液，然后加入15mL硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液，均質(zhì)1min，在10℃以4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的50mL容量瓶中,殘?jiān)俜謩e加入15mL、10mL硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液提取二次，離心后，合并上清液，并用硫酸鈉+亞硫酸鈉提取溶液定容至50mL，混合均勻，然后用玻璃濾紙過(guò)濾，待凈化。

(3)凈化

取25mL提取液放入C18固相萃取柱中，以約1mL/min的流速使樣液通過(guò)固相萃取柱，待樣液全部通過(guò)后，依次用5mL水和5mL甲醇+水淋洗液淋洗固相萃取柱，棄去全部流出液，減壓抽干固相萃取柱10min。最后用5mL甲醇洗脫，洗脫液收集于15mL玻璃離心管中，置于氮?dú)鉂饪s儀上在55℃吹至近干，用樣品定容液定容至1.0mL。定容液混勻后，過(guò)0.45um濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

同時(shí)取陰性樣品，按上述提取凈化步驟制備空白樣品提取液，用于配制基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

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