四環(huán)素類藥物殘留分析技術(shù)——測定微生物法

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

12.1.4.2 測定方法

TCs的殘留測定方法已有大量文獻(xiàn)報道，主要有微生物檢測法、免疫分析法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法等。目前，一些新興的檢測技術(shù)，如傳感器技術(shù)、流動注射法、表面等離子共振技術(shù)等也開始在TCs殘留分析中應(yīng)用。

(1) 微生物法(microbiological analysis)

微生物法是測定抗生素的基本分析方法，其優(yōu)點在于不需要復(fù)雜的樣品前處理、不需要精密儀器、操作簡便和檢測費用低廉等，適用于大量樣品的篩選，缺點是特異性較差，且不能用于定量檢測。常用于TCs測定的是蠟狀芽孢桿菌(ATCC11778)，其對CTC的靈敏度為0.005mg/L，對CTC和OTC的靈敏度均為0.025mg/L，對MNC的靈敏度均為0.001～0.002mg/L。

林修光等建立了用標(biāo)準(zhǔn)紙片法快速測定雞肉中TCs殘留量的微生物檢測方法。準(zhǔn)確稱取雞肉樣品10.0g，加入20mL磷酸鹽緩沖液(pH4.5)，3000～4000r/min均質(zhì)2min，靜置10min以上，4000r/min離心10min，取上清液檢驗。未出現(xiàn)抑菌圈者則判為TCs抗生素陰性，檢驗液與0.05mg/kg標(biāo)準(zhǔn)溶液如同樣產(chǎn)生10mm以上明顯的抑菌圈時，需進(jìn)行加熱確認(rèn)試驗。取兩支試管分別加入檢驗液、0.2mg/kg TCs標(biāo)準(zhǔn)稀釋液各4mL，置于沸水浴中加熱30min，取兩個試驗平m分別放置紙片為加熱檢驗液、加熱的0.2mg/kg TCs標(biāo)準(zhǔn)稀釋液、未加熱的檢驗液、未加熱的0.2mg/kg標(biāo)準(zhǔn)稀釋液等四種溶液后，置于35℃孵育17h觀察結(jié)果，未加熱的檢驗液和0.2mg/kg標(biāo)準(zhǔn)稀釋液出現(xiàn)正常的抑菌圈，加熱的檢驗液和0.2mg/kg標(biāo)準(zhǔn)稀釋液不出現(xiàn)抑菌圈，可判為TCs抗生素陽性。該方法的靈敏度為0.05mg/kg。DeWasch等采用微生物抑制測試篩選檢測豬肉和雞肉中的TCs殘留。凍豬肉和雞肉塊用接種枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基(pH6)篩選。Mwangi等采用蠟樣芽孢桿菌瓊脂擴(kuò)散方法，選用三個中等pH和兩種家禽器官進(jìn)行微生物檢測，確定OTC的LOD，并評價其能否在MRLs水平可靠地檢測家禽組織的OTC。LOD受生長介質(zhì)的pH和抗生素濃度的影響，在低pH下，檢測到肝臟和腎臟樣品中OTC的抑制區(qū)顯著增加，檢測結(jié)果均低于MRLs(腎臟600ng/g，肝臟1200ng/g)。蠟狀芽孢桿菌板在pH7的條件下能有效地對OTC進(jìn)行常規(guī)篩查，在肝臟和腎臟中的LOD分別為131.3ng/mL和33.4ng/mL。

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